本技术涉及一种靶向敲除GDF11基因构建早衰细胞模型的方法,通过双sgRNA技术在GDF11基因的第二个外显子及其上游内含子产生两个DNA双链断裂点,高效敲除GDF11基因。该方法鉴定简单,只需PCR扩增和电泳即可确定敲除成功,降低鉴定成本。本发明还建立了GDF11基因敲除的Neuro-2a神经母瘤细胞系,为研究内源性GDF11的生物学功能提供体外细胞模型。实验发现,敲除GDF11基因的Neuro-2a细胞具有衰老表征,为衰老领域研究提供工具,促进抗衰老研究,为延缓衰老提供研究基础。
背景技术
细胞衰老(Cellular Senescence)是细胞发生不可逆的细胞周期停滞、大分子损伤、形成分泌型表型和代谢失调的现象,涉及不同的生理和年龄相关疾病的多种特征。细胞衰老研究大多聚集于高增殖的细胞,由于细胞增殖引起端粒缩短,进而引起细胞复制性衰老。
近期以来,以终末分化细胞神经元为主的脑和视网膜等器官的衰老研究表明,终末分化细胞也可发生细胞衰老,其衰老机制与高增殖细胞不同,其具体机制才刚刚揭示冰山一角,尚缺乏过早衰老的细胞模型。
实现思路