本技术属于生物技术领域,介绍了一种创新的胸腺瘤原代上皮细胞永生化构建技术。该技术涵盖三个关键步骤:首先,进行组织解离以获取混合细胞群;其次,通过差速换液技术去除免疫细胞;最后,实现细胞的永生化。
背景技术
当前,肿瘤原代细胞系的构建方法主要包括从肿瘤组织中分离、提纯原代上皮细胞,继而对这些细胞进行永生化处理(如转染SV40大T抗原或hTERT等)。然而,原代细胞的分离和纯化过程复杂且时间耗费长,在肿瘤中,成纤维细胞增殖占优势的情况较多,肿瘤上皮细胞分离困难。由于肿瘤组织包含多种不同类型的细胞,包括免疫细胞、成纤维细胞、基质细胞等,如何高效、准确地分离出肿瘤上皮细胞是构建永生化肿瘤原代上皮细胞的首要挑战之一。肿瘤原代上皮细胞提纯过程通常存在杂质细胞多、原代上皮细胞活性差、难以增殖克隆等问题。这导致原代上皮细胞的传代和扩增非常困难,难以获得足够数量且高纯度的细胞进行永生化处理或用于后续研究。这些挑战在惰性程度较高的胸腺瘤中更为明显。因此,针对原代肿瘤上皮细胞提纯扩增困难的现状,特别是在胸腺瘤等较为惰性的肿瘤中,亟需开发一种操作性强、成功率高的永生化构建方法。
实现思路