本技术涉及一种猪多杀性巴氏杆菌多表位基因工程亚单位疫苗的制备方法及其应用,属于基因工程领域。该方法通过文献研究筛选出6个关键结构蛋白,利用基因工程技术构建多表位疫苗,旨在提高猪只对多杀性巴氏杆菌的免疫保护效果。
背景技术
猪巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)引起的急性流行性或散发性和继发性传染病,以纤维素性胸膜肺炎和咽喉炎以及败血症为主要特征。病猪会出现明显的高烧、气喘、呼吸困难、食欲废绝等情况。最急性感染往往呈败血症临床症状,使病猪在1天内死亡。该病具有较强的传染性、较大的危害性、较快的传播速度和较高的致死率,严重影响了规模化猪场中猪只的生长发育,阻碍了猪场和养猪业的发展。该病常与其他疾病混合感染,如猪丹毒、猪链球菌病等,使病情更加复杂,对患病猪的治愈更加困难。随着抗生素的滥用,Pm耐药菌株大量出现,且耐药谱越来越广,导致常规抗生素无法治疗,这使得免疫预防成为防控该病的重要途径。
灭活疫苗是采用加热、干燥、甲醛等外源途径的方式对细菌进行灭活处理并与佐剂混合,制备成对应的疫苗,是预防Pm的有效方式之一。一般是先进行灭活疫苗菌株的选择,对当地的优势流行菌株进行分离培养,然后通过理化方法处理,使其失去致病感染的能力但仍保持较好的免疫原性,最后选用免疫佐剂乳化制备而成,能有效降低猪群的死亡率。灭活苗存在交叉保护性差、免疫反应较长、抗体维持时间短且需要多次免疫。弱毒活疫苗是将Pm强毒株通过化学和物理的方法,人为的破坏其荚膜多糖等抗原成分,使其丢失或发生异变,最终筛选获得致弱菌株,弱毒苗存在返毒的危险,有极大的隐患。因此,开发可有效预防巴氏杆菌病的新型疫苗是当务之急。
基因工程亚单位疫苗(gene engineered subunit vaccine)是将基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗。亚单位疫苗是利用基因工程技术将猪多杀性巴氏杆菌的抗原基因连接在载体上进行表达的一种疫苗,能够明显的激发宿主的体液免疫和细胞免疫,产生较高水平的保护性抗体。外源抗原的表达系统主要有细菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞等。基因工程亚单位疫苗具有良好的安全性,为增加免疫原性通常会使用佐剂,其成分单一,没有无关的抗原,不存在毒力返强的问题。多表位疫苗可以达到一苗治疗多个血清型,提供交叉免疫保护力,降低治疗成本。多表位疫苗具有安全性好、成本低、使用简便及易区分感染动物和免疫动物的优势而具有良好的应用前景。
实现思路