本技术公开了家蚕卵巢特异表达启动子DSPP、克隆方法及其应用,所述启动子DSPP的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其来源于家蚕BMSK0014449基因。与现有技术相比,其优势在于:(1)本发明克隆获得的家蚕卵巢特异表达启动子DSPP及其转基因重组载体,所述启动子和重组载体均能实现外源基因在家蚕卵巢组织中特异性高效表达;(2)所述启动子及其重组载体具有极强的转录效率,能够与GAL4/UAS双元表达系统、CRISPR/Cas9基因编辑系统高效结合,从而特异、靶向完成基因在家蚕卵巢组织的表达或基因编辑。
背景技术
家蚕后基因组时代,对基因的功能和表达调控机制的研究成为首要任务,利用靶向性更强的基因研究工具来达到此目标的必要性也愈加明确。组织特异表达启动子不仅可以与GAL4/UAS双元表达系统结合,同时可以融入如今广泛使用的CRISPR/Cas9基因编辑系统,从而实现靶向性和灵活性更强的组织特异性基因敲除或外源基因表达。但目前可利用的家蚕组织特异性启动子仍然较少,不利于准确解读家蚕基因组信息和研究基因功能。
家蚕雌性生殖发育即卵子发生是一个漫长且复杂的生理过程,每一个卵子不仅需要保证其自身发育事件的正常进行,还需要储存必要的遗传物质和营养物质以协助子代胚胎的生长发育,从而完成繁殖使命。分子层面上,卵子发生涉及的基因功能非常广泛,同时由于家蚕卵子的成熟要依次经历三个时期,即卵黄生成前期、卵黄生成期和绒毛膜生成/卵壳生成期,使得一些基因的表达有很强的时空性,并处于动态的调控网络中,这些特点都导致使用一般的转基因技术来探明卵子发生中的关键基因及其功能有很大的局限性。通过利用卵巢特异启动子不仅可以避免全身性基因敲除的致死性,同时可以解答相关基因在生殖发育过程中的具体功能,以及从更精确的分子视角探索其动态的调控机制,从而拓宽对家蚕生殖遗传发育的认识。
实现思路