本技术一方面公开了一种猪轮状病毒G9P23‑VP8‑N蛋白,所述G9P23‑VP8‑N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还公开了一种猪轮状病毒基因工程亚单位疫苗,所述疫苗包括有效量的权利要求1所述的G9P23‑VP8‑N蛋白和药学上可接受的佐剂。本发明制备的G9P23‑VP8‑N蛋白具有表达量高、制备方便、容易纯化、生产成本低和免疫原性好的优点。同时以此蛋白为基础制备的猪轮状病毒基因工程亚单位疫苗具有良好的免疫原性。因此,本发明的G9P23‑VP8‑N蛋白和猪轮状病毒基因工程亚单位疫苗具有良好的应用前景。
背景技术
猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)是全球范围内导致猪特别是哺乳仔猪腹泻的重要病原之一,特别是在规模化养殖场,PoRV感染可引起显著的发病率和死亡率,严重影响养猪业经济效益。猪轮状病毒主要感染小肠上皮细胞,从而造成细胞损伤,引起腹泻。寒冷、潮湿、污秽环境和其它应激因素可增大病的严重性。本病多发生于晚秋、冬季和早春。各种年龄段的猪都可感染,感染率最高可达90%~100%,在流行地区由于大多数成年猪都已感染而获得免疫。因此,发病猪多是8周龄以下的仔猪,日龄越小的仔猪,发病率越高,发病率一般为50%~80%,病死率一般为10%以内。
猪轮状病毒属于呼肠孤病毒科(Reoviridae),轮状病毒属(Rotavirus),为双链RNA病毒,基因组包含11段双链RNA,编码6种病毒结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和5种非结构蛋白(NSP1~NSP5);病毒粒子有3层衣壳,最内层分别为VP1、VP2和VP3,其包裹着轮状病毒的基因组RNA,中间层为VP6,最外层衣壳由VP4和VP7蛋白组成(如图1所示)。在猪感染PoRV的基因型中,G3、G4、G5、G9和P5、P7、P13、P23型为主,目前最流行的为G5和G9型“Tao R,Chang X,Zhou J,Zhu X,Yang S,Li K,Gu L,Zhang Xand Li B(2023)Molecularepidemiological investigation of group Aporcine rotavirusin EastChina.Front.Vet.Sci.10:1138419.”,约70%以上为这2型。
目前,针对猪轮状病毒的上市疫苗仅有G5型的活疫苗,减毒活疫苗则可能存在安全性问题,可能在母猪和仔猪中引发不良反应。另外,猪轮状病毒整体比较偏弱,再MA104细胞培养时一般没有明显的病变,且培养滴度也不高,所以,全病毒的灭活疫苗不仅在生产上复杂、且也容易造成病毒的扩散。因此,有必要开发一款合适的猪轮状病毒基因工程亚单位疫苗。
实现思路