本技术提供了一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体、基因、引物、装置、药物及制备方法。所述制备方法包括步骤:S1,采用如SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列构建重组质粒,并通过大肠杆菌表达系统进行表达;S2,从表达后的菌体中获取包涵体沉淀;采用包涵体裂解缓冲液对所述包涵体沉淀进行孵育,并收集上清液;所述包涵体裂解缓冲液中含有尿素;S3,对所述上清液进行透析复性,得非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体。本发明通过尿素变性及透析复性,得到抗非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的单链抗体。
背景技术
单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)通常是由抗体重链可变区(variable domain of heavy chains,VH)及轻链可变区(variabledomain of lightchains,VL)由一个连接肽连接而成的基因工程抗体分子,是具有抗体活性的较小功能结构单位之一。scFv分子量小,具备良好的组织穿透性;scFv缺乏Fc(Fragmentcrystallizable)片段,因此其免疫原性较弱,而scFv在分子改造方面具有独特优势,如:添加特定的标签蛋白[4]、构建三聚体[5]及双特异性抗体等。目前scFv已应用于分子诊断、靶向药物、肿瘤的治疗及诊断等领域。与单克隆抗体制备相比,scFv可在大肠杆菌(E.coli)或乔氏短杆菌(Brevibacillus choshinensis)等原核生物中以低成本、高产量进行制备。
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起的一种急性、热性和广泛出血性疾病,其主要感染家猪及野猪,毒力毒株感染猪只后通常会引起急性临床症状,如高热,嗜睡、食欲不振、皮肤及脏器出血等,致死性达到100%。ASFV自1921年于肯尼亚首次报道以来,已在全球广泛蔓延。
虽然scFv具有独特的生物学特性,在重要病毒性疫病的防控及科研领域中具有重要应用价值。但是,非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的有效制备存在技术难度,直接采用常规方法无法有效得到相应的单链抗体。鉴于此,有必要提供一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体、基因、引物、装置、药物及制备方法,以解决或至少缓解上述如何有效制备非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的技术缺陷。
实现思路